SARS-CoV-2 nukleinsyretestsæt

Anvendelsesformål:

SARS-CoV-2 nukleinsyretestkit anvendes til kvalitativ påvisning af nukleinsyre fra COVID-19 i nasopharyngeale podninger, orofaryngeale podninger og sputum. Testresultaterne giver et molekylært diagnosegrundlag for infektion eller mistænkte patienter og bør ikke bruges som det eneste kriterium for klinisk diagnose.

Materialer:

Test procedure:

A. Prøveforberedelse

Ekstraheret RNA er udgangsmaterialet til SARS-CoV-2 nukleinsyretestsættet.

Vigtigt: Hver nukleinsyreekstraktionsprocedure skal udføres samtidigt med én positiv kontrol (40 μL, fortyndes med sterile saltvandsopløsninger/PBS til ønsket volumen) og én negativ kontrol (40 μL, fortyndes med sterile saltvandsopløsninger/PBS til ønsket volumen).

Det anbefales at bruge følgende kommercielle nukleinsyreekstraktionssæt: PureLinkTM Viral RNA/DNA Mini Kit (Invitrogen); Viral RNA Mini kit (QIAGEN); TIANamp Hi-DNA/RNA Kit (TIANGEN);

B. Opsætning af reaktionsblanding

1. Alle reagenser og prøver skal optøs fuldstændigt, blandes fuldstændigt og centrifugeres kort ved stuetemperatur (ca. område 18 til 25 grader) før brug.

2. Forbered den nødvendige volumen af ​​reaktionsblandingen i et polypropylen-mikrocentrifugerør af passende størrelse.

3. Pipetter 25 µL af reaktionsblandingen i hver påkrævet brønd i en passende optisk 96-brøndsreaktionsplade eller et passende optisk reaktionsrør.

C. Skabelontilsætning

1. Tilsæt 5 μL ekstraheret RNA fra prøver/ Positiv kontrol/ Negativ kontrol. Det samlede volumen er 30 μL.

2. Bland prøverne og kontrollerne grundigt med reaktionsblandingen ved at pipettere op og ned/Vortex.

3. Luk 96-brøndreaktionspladen med passende låg eller optisk klæbende film og reaktionsrørene med passende låg.

4. Centrifuger 96-brøndsreaktionspladen i en centrifuge med en mikrotiterpladerotor i 30 sekunder ved ca. 2500 rpm.

D. Programmering af realtids-PCR-instrumentet

For grundlæggende information om opsætning og programmering af de forskellige realtids-PCR-instrumenter henvises til brugermanualen til det respektive instrument. Analysen er optimeret til ABI7500 Real-Time PCR-systemet. PCR-kørslen udføres med cyklusbetingelser som beskrevet i tabellen nedenfor.

Definer fluorescensdetektorerne

*Indstil venligst instrumentets interne fluorescensreference til "Ingen", for eksempel: For ABI-seriens instrumenter skal "Passiv reference" indstilles til "Ingen".

E. Dataanalyse

Indstil venligst analyseparametrene og analyser dataene i henhold til betjeningsvejledningen til de relevante instrumenter.

Tag ABI 7500 som et eksempel:

Baseline bør indstilles til et område, der eliminerer baggrundsfluorescensen fundet i de tidlige amplifikationscyklusser, men som ikke overlapper området, hvor forstærkningssignalerne stiger over baggrunden (Startværdi:3~10; Slutværdi: {{2} }). Cyklustærsklen (Ct) bør være i bunden af ​​den eksponentielle fase. Klik på "Analyse" for at få analyseresultatet automatisk, og læs detektionsresultatet i "Rapport" vinduet.

Populære tags: sars - cov-2 nuklein syre test sæt, Kina, leverandører, fabrikanter, fabrik, bulk